Ход работы

Для взятия пробы водопроводной воды необходимы стерильная колба, перчатки, стерильные пипетки, стерильные чашки Петри и пробирки с физиологическим раствором и расплавленная диагностическая среда МПА.

Проведение разведений и посев в чашки Петри.

Перед посевом все чашки Петри подписываются. Для этого чашка переворачивается и на ее дне карандашом для стекла указывается свой номер и номер посева (1, 2, 3 и т.д.).

Из отобранной из нескольких кранов воды по 1 литру (не менее чем из трех источников) готовят среднюю пробу в количестве 300 мл. От нее стерильной пипеткой берут 1 мл раствора и совершают пересев на среду, как показано на схеме.

Схема посева микроорганизмов исследуемого объекта по методу счета колоний

При помощи груши, которую берут в левую руку, набирают в пипетку раствор так, чтобы его уровень был на несколько сантиметров выше, чем насечка. Затем грушу быстро(!) снимают и закрывают отверстие пипетки указательным пальцем правой руки. Держа пипетку одной рукой, осторожно приподнимают указательный палец и спускают жидкость до насечки, доводя объем точно до 1 мл. После этого жидкость переносят в первую чашку Петри, осторожно приоткрыв левой рукой ее крышку (полностью крышку открывать нельзя).

Этой же пипеткой берут еще 1 мл смывного раствора и переносят его в первую пробирку с 9 мл физиологического раствора - получают первое разведение. Эту пипетку нельзя вносить в раствор, находящийся в пробирке и дотрагиваться до ее стенок. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают.

После этого второй стерильной пипеткой берут по 1 мл раствора из первого разведения и вносят его сначала во вторую чашку Петри, а затем во вторую пробирку с 9-ю мл стерильного физиологического раствора и получают второе разведение. Аналогичным образом получают третье и если нужно четвертое разведение, проводя параллельные посевы на чашки Петри .

В каждую чашки Петри приоткрыв ее крышку (полностью открывать крышку нельзя) наливают расплавленный и остуженный до 45-50 градусов С мясо-пептонный агар так, чтобы он почти покрывал дно чашки. После этого чашки сразу же закрывают и тщательно перемешивают, чтобы пробы равномерно распределились во всем объеме питательной среды. Перемешивать надо осторожно, легкими вращательными движениями закрытой чашки, чтобы агар не попал на края чашки и ее крышку. Долго вращать чашки нельзя, т.к. агар может застыть комками. Затем чашки поставить на горизонтальную поверхность до застудневания питательной среды.

После желирования питательной среды, чашки переворачивают верх дном и в таком положении ставят в термостат, предварительно проверив наличие на них номера. Термостатирование проводят при температуре 36 ± 1 градусов С в течение 24 часов.

Подсчет выросших колоний.

Подсчет выросших колоний производится при помощи счетной камеры или если ее нет при помощи лупы. Для подсчета берутся чашки, где растут изолированные друг от друга колонии. Для подсчета чашку переворачивают вверх дном и отмечают карандашом по стеклу или чернилами посчитанные колонии. Если количество колоний, выросших на чашке, превышает 100, их подсчет ведут не на всей площади чашки, а на нескольких сегментах. Для этого дно чашки при помощи циркуля и карандаша по стеклу делят на восемь равных сегментов. Выбирают 2 или 3 наиболее типичных и подсчитывают в них количество колоний. Затем рассчитывают общее количество колоний выросших на чашке Петри по формуле 3:

, (3)

где N - общее количество микроорганизмов в чашке Петри;

А, В и С - количество микроорганизмов выросших на каждом из сегментов на которых ведут подсчет;

8 - количество сегментов, на которые разделена чашка Петри;

3 - число сегментов, на которых ведут подсчет микроорганизмов.

Подсчет выросших колоний ведут на всех чашках Петри.